Лабораторная работа № 2. Получение каллусов из незрелых зародышей и узлов кущения пшеницы

Каллусы из различных органов пшеницы на искусственных питательных средах впервые были получены в 1968 году. Их можно использовать для изучения солеустойчивости, устойчивости к температурному стрессу, получения суспензий и протопластов. Для индукции каллусогенеза обычно используют стерильные пробирочные растения, выращенные из зародышей на средах без гормонов. Растения для получения каллусов можно вырастить в теплице. Для этого набухшие семена помещают на 5 недель в холодную камеру на яровизацию при 2°С, проростки высаживают в вегетационные сосуды и выращивают до достижения молочною спелости. Незрелые зародыши выделяют и переносят на питательные среды.

Цель работы: получить каллусы из незрелых зародышей и узлов кущения пшеницы.

Оборудование и материалы: ламинар-бокс, пробирки с питательной средой МС, препаровальные иглы, пинцеты, скальпели, стерильная бумага, 6% раствор хлорамина, стерильная дистиллированная вода, спиртовки, флаконы с 96% спиртом.

Объект исследования: растения пшеницы в стадии молочной спелости, пробирочные растения пшеницы.

Ход работы: для получения каллусной ткани незрелые зародыши пшеницы изолировать на 12-е сутки от начала цветения. Поместить их в дезинфицирующий раствор на 5 минут. Промыть 3 раза стерильной дистиллированной водой, а затем поместить в стерильные чашки Петри. Препаровальной иглой вычленить зародыши и перенести в пробирки с питательными средами. Пробирки с зародышами закрыть пробками и поставить в штатив. Культивируют в светлой культуральной комнате при 25°С.

Пробирочные растения пшеницы выложить на стерильные бумажные матрасики и разрезать на небольшие части по 5—10 мм, выделить междоузлия с участками листового влагалища. Перенести экспланты в пробирки на питательные среды МС + 2,4-Д в концентрации 4 мг/л. Культивируют в светлой культуральной комнате при 25°С.

Задание: рассмотреть каллусные клетки под микроскопом и зарисовать через 2—4 недели, сделать выводы о морфологии каллусов.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ   ОРИГИНАЛ     След >