Лабораторная работа № 11. Клональное микроразмножение картофеля путем черенкования побегов

Микроклональное размножение пробирочных растений осуществляют с помощью черенкования. Такое размножение основано на подавлении апикального доминирования и активации пазушных меристем при удалении верхушки побега. Из пазушных почек на питательных средах образуются побеги.

Растения, сформировавшие 5—6 листочков, в стерильных условиях извлекают из пробирок и делят на сегменты (отрезок стебля с листом и пазушной почкой). Черенки высаживают на глубину междоузлия в питательные среды либо без гормонов, либо с добавлением ауксинов. Черенки культивируют в тех же условиях, что и меристемы. Рост стебля и корней начинается на 3—4 день после посадки на питательную среду, а полностью растения формируются через 12—15 дней. Каждое последующее черенкование проводят через 24—28 дней. Из одного растения можно получить 5—8 черенков, а через 2—3 месяца — 3—5 тыс. черенков.

Если почки или черенки высадить на питательные среды с высоким содержанием цитокининов, то образуется конгломерат почек и побегов. Полученные побеги легко отделяются друг от друга, их можно либо укоренить, либо использовать для дальнейшего микрочеренкования.

Цель работы: провести микроразмножение картофеля путем микрочеренкования побегов.

Оборудование и материалы: ламинар-бокс, пробирки с проростками, пробирки с питательной средой МС, скальпели, препаровальные иглы, спиртовка, флакон с 96% спиртом.

Объект исследования: стерильные проростки картофеля в пробирках.

Таблица 4

Модифицированная питательная среда Мурасиге — Скуга для микроразмножения картофеля черенкованием побегов

Компоненты питательной среды

Маточный раствор макросолей

50 мл/л

Маточный раствор микросолей

1 мл/л

Fe-хеллат

5 мл/л

СаС12

50 мл/л

Компоненты питательной среды

Тиамин-НС1

1 мг/л

Пиридоксин-НС1

1 мг/л

Никотиновая кислота

2 мг/л

Аденин

40 мг/л

Кинетин

0,5 мг/л

Гибберелловая кислота

2 мг/л

Пантотенат Са

10 мг/л

Активированный уголь

10 г/л

Сахароза

30 г/л

Агар-агар

7 г/л

pH 5,8

Ход работы: подготовить ламинар-бокс и инструменты к работе. В ламинаре извлечь стерильные проростки картофеля из пробирок. Побеги разрезать на сегменты (отрезок стебля с листом и пазушной почкой). Часть стебля над листом должна быть в 2—3 раза меньше, чем часть ниже листа. Микрочеренки помещают в питательную среду на глубину междоузлия. Пробирку закрыть пробкой, поместить в штатив и перенести в культуральную комнату. Необходимо соблюдать стерильность.

Задание: пробирку с черенком зарисовать. Через 1, 2, 3 недели проводят наблюдение за развитием побега и зарисовывают этапы развития растения из черенка.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ   ОРИГИНАЛ     След >