Лабораторная работа № 13. Получение безвирусного посадочного материала методом термотерапии в сочетании с культивированием апикальных меристем

В случае заражения посадочного материала вирусами применяют термотерапию (использование сухого горячего воздуха). В случаях заражения растений мозаичными, веретеновидными, нитевидными, палочковидными вирусами термическая обработка малоэффективна. В связи с этим дополнительно используют метод апикальных меристем. Для этого после термообработки апикальную меристему растений картофеля срезают и помещают в пробирки на питательные среды. Термообработку обычно проводят осенью и зимой. Весной из растений вычленяют пазушные почки от 0,3 до 1 мм и высаживают на питательные среды (МС без гормонов, pH 5,7).

Цель работы: изучить влияние высокой температуры на развитие апикальных меристем картофеля.

Оборудование и материалы: кюветы с песком, флаконы с водой, ламинар-бокс, бинокулярный микроскоп МБС-9 или МБС-10, стерильные скальпели, препаровальные иглы, флаконы с 96% спиртом, хлорамином, спиртовки, пробирки с питательными средами.

Объект исследования: клубни картофеля.

Ход работы: здоровые клубни картофеля тщательно промыть проточной водой. Клубни обработать дезинфицирующим раствором (спирт, хлорамин), промыть стерильной дистиллированной водой. Вырезать глазки с частью паренхимы (1,5 х 1,5 см) и поместить в кюветы для проращивания и термотерапии.

Глазки разместить в кюветах со стерильным песком и проращивать 1—2 недели при температуре 28—30°С, 4 недели при температуре 37—38°С и влажности воздуха 70—80%. Дважды в день песок увлажнять, через 7—10 дней провести подкормку раствором Кнопа и микроэлементов по прописи Мурасиге-Скуга: 5 мл маточного раствора на 1 л раствора Кнопа.

Проростки, прошедшие термотерапию, поместить в 6% раствор хлорамина на 5 мин, промыть стерильной дистиллированной водой. В ламинар-боксе под микроскопом вычленить апикальные меристемы и поместить их в пробирки с питательными средами. Весь растительный материал перенести в культуральную комнату с нормальными условиями.

Клубни жаровыносливых сортов можно сразу выращивать при температуре 37—38°С и влажности воздуха 70%. Режим тепловой обработки для каждого сорта подбирают экспериментально.

Задание: результаты зарисовать через 2, 4, 6 и 8 недель, сделать выводы о влиянии высокой температуры на зараженный посадочный материал.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ   ОРИГИНАЛ     След >