Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Товароведение arrow ТЕХНОЛОГИЯ МОРЕПРОДУКТОВ
Посмотреть оригинал

Нуклеиновые кислоты.

Нуклеиновые кислоты существуют двух типов: рибонуклеиновая (РНК) и дезоксирибонуклеиновая (ДНК), являющиеся полимерами нуклеотидов. Нуклеотид состоит из трех элементов: а) пуринового и пирамидонового основания, связанного с азотом N-глюкозидной связью; б) пятиуглеродного циклического сахара (основание, связанное с сахаром, называется нук- леозидом); в) фосфата, связанного эфирной связью с 5-м углеродом сахара. В каждой из нуклеиновых кислот двух основных классов встречаются нуклеотиды четырех типов. Они различаются основаниями: аденин (А), гуанин (Г), урацил (У), цитозин (Ц) в РНК и аденин, гуанин, тимин (Т) и цитозин в ДНК. Кроме того, ДНК и РНК различаются структурой сахарофосфатных остовов: РНК содержит рибозу, а ДНК — дезоксирибозу.

Для приготовления ДНК 1 кг семенников кальмара гомогенизируют в ножевом гомогенизаторе с 5л раствора 0,15 М NaCl, 0,015 М цитрата натрия, 0,01 М ЭДТА, растворяют в воде, доводят pH до 8,0 и затем добавляют остальные компоненты. К гомогенату добавляют 20%-й раствор додецилсульфита натрия (ДСН) до концентрации 2 % и выдерживают 30 мин в термостате при 37 °С. К образовавшемуся вязкому раствору добавляют сухой хлорид натрия до концентрации 1 М. Гомогенат переносят в колбу с притертой пробкой и тщательно встряхивают 10...15 мин с 15 л смеси хлороформ : изоамиловый спирт в соотношении 24:1. Смесь переносят в стаканы и центрифугируют 30 мин. Надосадочная жидкость расслаивается на три фракции: в верхней содержатся нуклеиновые кислоты. Верхнюю фракцию осторожно удаляют с помощью шприца в колбу (или декантируют) и повторяют обработку смесью хлороформ : изоамиловый спирт 2...3 раза, пока раствор нуклеиновых кислот не станет прозрачным. Полученный раствор отделяют и выливают в стакан с двойным объемом охлажденного 96%-го этилового спирта при помешивании круговыми движениями. ДНК выпадает в осадок. Спиралевидные нити переносят в стакан с небольшим количеством 70%-го этилового спирта, промывают спиртоэфирной смесью (1 : 1), затем эфиром и сушат при комнатной температуре.

Выход ДНК колеблется в зависимости от хранения семенников при отрицательной температуре и способа фиксации — от 1 до 2 г из 1 кг семенников (0,1...0,2 %). При получении ДНК из отходов от переработки гонад при производстве лецитина выход ее не превышает 0,04 %.

 
Посмотреть оригинал
Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter
< Предыдущая   СОДЕРЖАНИЕ   Следующая >
 

Популярные страницы