Ионообменная хроматография.

В качестве стационарной фазы в колоночной хроматографии часто применяют ионообменные смолы с заряженными периферическими функциональными группами. Таким материалом обычно служат различные силикагели или полимеры, например стирола и дивинилбензола. Этим методом можно разделять любые соединения, если они содержат ионизированные молекулы или группы. Метод особенно эффективен для разделения сильнонолярных веществ, к которым относятся аминокислоты, пептиды, азотистые основания, углеводы.

Выделяют две разновидности ионообменной хроматографии: анионную и катионную.

При анионной хроматографии на колонке задерживаются отрицательно заряженные частицы — анионы, поскольку неподвижная фаза имеет положительный заряд поверхности. Такие анионные матрицы (аниониты) содержат ионы аммония (—NH₃) или триалкиламмонийные группы (—NR₃).

При катионной разновидности, наоборот, задерживаются положительно заряженные группы и молекулы, поскольку неподвижная фаза имеет противоположный отрицательный заряд. Катионные матрицы (катиониты) создают сульфированием или фосфорилированием полимерной смолы, которая приобретает, соответственно, группы S0₃ и РО^ .

Подвижной фазой для данного метода разделения обычно служат водные растворы солей, кислот и оснований с определенным значением pH. Ионы Н⁺, ОН^-, кислотные остатки или катионы металлов до проведения анализа связаны с ионизированными группами полимера в качестве противоионов. Противоионами катионитов обычно являются Н⁺ или Na а противоионами анионитов — ОН^- или СГ.

При разделении на колонке ионы анализируемого вещества конкурируют с противоионами подвижной фазы за ионизированные группы полимерной матрицы.

За последние годы ионообменная хроматография зарекомендовала себя не только в исследовательской практике, но и как промышленный метод выделения многих биомолекул. С помощью ионообменной хроматографии выделяют ценнейшие компоненты молока, такие как лактоферрин, гликомакропептид, а-лактальбумин, р-лактоглобулин и др. ^[1]

• [1] Для молекулярной массы использована единица дальтон — то же, что а.е.м.