Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Математика, химия, физика arrow БИОХИМИЯ ДЛЯ ТЕХНОЛОГОВ в 2 ч. Часть 1.
Посмотреть оригинал

Афинная хроматография.

Метод афинной хроматографии также основан на сорбционных процессах, но отличается от других видов хроматографии особой избирательностью действия. Этот метод используют для разделения макромолекул, таких как полипептиды, белки, ферменты и пр. В молекулах этих соединений обычно есть определенные участки, способные образовывать комплексы с различными лигандами.

Зная эту особенность, нужные лиганды закрепляют на неподвижной матрице, а исследуемую смесь пропускают через колонку. В качестве неподвижной фазы обычно используют различные гели типа сефадекса, триса- крила и др. Подвижной фазой чаще всего являются буферные растворы: ацетатный или фосфатный.

При прохождении через колонку отделяемое вещество (целевой компонент) комплементарно связывается со специфичным но отношению к нему лигандом и задерживается неподвижной фазой, а другие компоненты смеси удаляются из колонки. Например, аминокислотные остатки Гис и Три комплементарно соединяются с иминодиацетатными группами.

В молекулах биополимеров комплексообразующие центры часто находятся не на поверхности, а в глубине структуры и недоступны для лиганда, закрепленного на матрице. Чтобы преодолеть эту трудность, лиганды пришивают к неподвижной фазе через дополнительный белок — спейсер (от англ, spacer — разделитель).

Снятие евзанного компонента с матрицы осуществляют разными способами:

  • • внесение элюента с пониженным значением pH, что приводит к диссоциации отделяемого компонента от лиганда за счет протонирования активных групп и комплексообразующего центра;
  • • использование элюента, содержащего вещество, способное образовать с лигандом более устойчивый комплекс, чем целевой компонент (так называемый лигандиый обмен);
  • • использование элюента, сочетающего в себе особенности двух предыдущих вариантов — и пониженное значение pH, и агент, образующий комплекс с лигандом.

Если изменять диапазон pH элюента или вводить в него некоторые ионы (SCN , CF3COO , СЮ4, СС1300 ), этим можно контролировать прочность соединения целевого компонента с лигандом.

Метод афинной хроматографии широко применяется не только в научных исследованиях, но и в промышленном производстве.

 
Посмотреть оригинал
Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter
< Предыдущая   СОДЕРЖАНИЕ   Следующая >
 

Популярные страницы