Методы определения гормонов в биологических жидкостях

При изучении взаимосвязи гормонов и поведения важным и общепринятым подходом является определение гормонов в сыворотке или плазме крови, моче, слюне и фекалиях. Использование менее инвазивных процедур полезно в полевых исследованиях, а также тогда, когда необходимы повторные гормональные определения. В настоящее время для определения гормонов широко используются радиоиммунный и им- муноферментный методы. В анализах используют антитела, которые специфически связывают исследуемый гормон. Связывание гормона антителами высокоспецифично, что позволяет анализировать малые количества гормонов. Методы весьма точны и чувствительны, причем в течение одного рабочего дня можно обработать несколько сотен проб. Принцип радио- иммунного анализа основан на конкуренции между меченым и немеченым гормоном, содержащимся в стандарте или образце, который подвергается анализу, за ограниченное количество связывающих мест на антителах. После инкубации количество меченого гормона, связанного с антителом, обратно пропорционально количеству немеченого гормона, присутствующего в образце. После измерения радиоактивности образца на основании калибровочной кривой рассчитывается концентрация гормона в определяемых образцах. Принцип иммунофермент- ного метода аналогичен радиоиммунному, но вместо меченого гормона используется его конъюгат с пероксидазой, которая при добавлении специального реагента (тетраметилбензиди- на) окрашивает раствор в синий цвет. При добавлении к исследуемому образцу конъюгата устанавливается равновесие между конъюгатом и эндогенным гормоном за связывание с антителами.

После разделения свободного и связанного антителами гормона и конъюгата количество связанного антителами конъюгата обратно пропорционально количеству гормона в образце. Степень окраски прямо пропорциональна количеству конъюгата, связанного с антителами. После измерения оптической плотности раствора на основании калибровочной кривой рассчитывается концентрация гормона в определяемых образцах.

Открытие возможности иммобилизации антигена и антитела на различных носителях с сохранением их связывающей активности позволило расширить использование ИФА в различных областях биологии и медицины. Появление моноклональных антител послужило дальнейшему развитию ИФА, что позволило повысить его чувствительность, специфичность и воспроизводимость результатов.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ   ОРИГИНАЛ     След >